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              小鼠胚胎成纖維細胞傳代培養
            1. 發布日期:2022-05-23      瀏覽次數:100
              • 小鼠胚胎成纖維細胞傳代培養:
                一、原理 

                  細胞在培養瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養)。   傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分   瓶。   
                二、材料和試劑   

                1、細胞:貼壁細胞株   

                2、試劑:0.25%、1640培養基(含10%小牛血清)   

                3、儀器和器材:倒置顯微鏡,培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等  
                三、操作步驟  

                 1、將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。   

                2、加入0.5—1ml 0.25%溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。  

                 3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將棄去,加入10ml培養液終止消化。 觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發白并出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。   

                4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養液塞好橡皮塞,置37下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。   

                附:消化液配制方法:   稱取0.25克蛋白酶(活力為1250),加入100mlCa2+、Mg2+Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4保存,用前可在37下回溫。   溶液中也可加入EDTA,使zui終濃度達0.02%。

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