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              游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒的實驗原理和樣本要求
            1. 發布日期:2018-11-27      瀏覽次數:1307
              • 游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒[實驗原理]

                試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被游離脂肪酸(FFA)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人游離脂肪酸(FFA)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

                [樣本處理及要求]

                1.  血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

                2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

                3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

                4.  細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

                注:標本溶血會影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

                [需要而未提供的試劑和器材]

                1.酶標儀(450nm)

                2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

                3.37℃恒溫箱

                4.蒸餾水或去離子水

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                021-57763112

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