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              elisa檢測系統穩定應留意以下原理
            1. 發布日期:2019-03-22      瀏覽次數:802
              • ELISA檢測系統可以說是現在使用多的檢測方法,而且技術手段很多,對于花板,假陽性,全顯色,全部顯色,顯色比空缺還低,這些都起到了至關重要的作用,一定要多注意。
                應留意以下原理:因為蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用,這種物理吸附長短特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯后才能固定在固相載體上。

                包被原的性質很重要,蛋白濃度,是否降解,這關系到你做出的抗體可不可以被其識別,所以保留抗原很重要,我做重組蛋白時,師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。就是讓大量不相關的蛋白質充填這些曠地空閑,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質的再吸附。但有時因為試驗的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。
                還有有的包被原可能不是蛋白,對于和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被,親和素:先親和素先包被載體,加入化的DNA,這種包被方法平均、牢固,已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。


                 

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